### 培养条件

气相条件为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定在37℃。对于细胞的传代，首次建议按1:2的比例进行传代，确保细胞健康成长。传代后每两天更换培养液。

### 注意事项

建议同时购买培养基与细胞，以获得优惠。收货后，请勿立即打开瓶盖，需核对培养瓶标示的细胞名称是否与订单一致，并检查瓶身是否有破损或漏液情况。如未发现异常，使用显微镜观察细胞的生长状态并拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x的各一张）。前三天的照片是售后支持的重要依据，若未提供照片将默认收到的细胞状态良好。

### 贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养基，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶内，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，当大部分细胞变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶，加5ml以上的完全培养基终止消化。

3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液，并将其转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml的完全培养基重新悬浮。

4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（可分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，置于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

### 悬浮细胞传代步骤

1. 半换液处理：将培养瓶竖直置于培养箱中静置1小时，轻轻吸出约3ml的培养基，补充3ml的完全培养基，如培养基变色较慢，可直接添加500μl FBS。传代时可直接补给5ml培养基，并分至两个培养瓶中，通常在进行3次传代后可进行离心传代，去除死细胞。

2. 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，再补加1-2ml培养液重悬。然后将细胞悬液按1:2比例分至新的T25瓶中，添加6-8ml根据说明书配置的新完全培养基，以保持细胞的生长活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

### 细胞冻存与复苏

1. 当细胞生长到覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，显示细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）混匀后，装入冻存管中。

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后期需要转入液氮，必须在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转入液氮罐中。

### 注意事项

在运输过程中，有些细胞可能因贴壁不牢而脱落，属正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清以进行过渡培养（后期对比培养），然后添加胰酶进行消化，最后重新传代按1:2的比例分瓶，补充新培养基至5-8ml每瓶，放入37℃、5% CO2的培养箱中。

### 问题处理

在细胞出现问题时，有重发的情况，如细胞运输途中出现损坏、污染等，应在48小时内提供相关实验结果。若发现细胞活性问题，需在7天内提供结果并进行验证。未能在约定时间内反馈的，将视为产品合格。

### 结论

选择Z6·尊龙凯时的细胞培养解决方案，确保细胞的健康与活力，助力您的科研进程。